間充質干細胞成軟骨誘導分化試劑盒
,成軟骨誘導液
貨號：YJ-MSCYD-003
價格： 1980.0
規格： 100ml 200ml
產品描述
本產品為團隊精心優化的間充質干細胞成軟骨誘導分化試劑盒，可增強間充質干細胞向成軟骨細胞分化的能力。
本產品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。
產品組成成分及保存
試劑名稱 | 體積（100mL規格/200mL規格） | 保存條件 |
誘導分化添加劑Ⅰ | 5mL / 10mL | -20℃，1 Year |
誘導分化添加劑Ⅱ | 1mL / 2mL | -20℃，1 Year |
優質胎牛血清 | 10mL / 20mL | -20℃，1 Year |
細胞基礎培養基 | 84mL / 168mL | 4℃，1 Year |
甲苯胺藍染色液 | 5mL / 10mL | RT（室溫），1 Year |
? 注意：1.為保證產品的有效性，請避免反復凍融。
2. 誘導分化添加劑Ⅱ須現用現配，加入培養基后，須在12小時內用完，否則可能影響實驗效果。
3. 配制好的誘導分化預混液（不含誘導分化添加劑Ⅱ）保存于2-8℃，有效期為2周。
產品使用說明（2D/3D培養）
1. 成軟骨誘導分化培養基的配制
①室溫條件下融化添加劑及血清。（注意：若添加劑或血清中有沉淀物，屬正?，F象，無須過濾，避免成分丟失。）
②配制誘導分化預混液：以下簡稱預混液。根據實驗用量，于無菌操作臺中配制。建議每次配制50mL，先加細胞基礎培養基和胎牛血清，再加誘導分化添加劑。（配制比例見表一）
試劑成分 | 配制比例 | 50mL配制體系 |
誘導分化添加劑Ⅰ | 5% | 2.5mL |
優質胎牛血清 | 10% | 5mL |
| 85% | 42.5mL |
③配制誘導分化完全培養基：根據實驗用量，按照1%的比例向預混液中添加誘導分化添加劑Ⅱ，如每1mL預混液添加10uL誘導分化添加劑Ⅱ。（注意：誘導分化添加劑Ⅱ須現用現加，配制完成的誘導分化完全培養基12h內使用完，否則將失效。）
2. 2D成軟骨誘導分化實驗步驟
①建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態良好的間充質干細胞，將其消化下來，離心收集，使用含10%FBS的培養基調整細胞密度，均勻鋪于培養瓶/板中。將接種好的細胞置于37℃，5%CO2，飽和濕度的培養箱中培養。（細胞接種詳情參考表二）
培養器皿 | 底面積 | 細胞量 | 培養液體積 |
24孔培養板 | 2cm/孔 | 2×105cell/孔 | 1mL/孔 |
12孔培養板 | 4.5cm/孔 | 4.5×105cell/孔 | 2mL/孔 |
6孔培養板 | 9.6cm/孔 | 9.6×105cell/孔 | 2mL/孔 |
T25培養瓶 | 25cm | 25×105cell | 5mL |
6cm培養皿 | 21cm | 21×105cell | 5mL |
10cm培養皿 | 55cm | 55×105cell | 10mL |
表二
②待細胞匯合度達80%~100%時，即可進行誘導分化。
③小心吸棄細胞培養上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導分化完全培養基，置于37℃恒溫細胞培養箱中培養。（注意：完全培養基加入細胞前需提前置于37℃預熱。）
④每2day~3day換用新鮮的誘導分化完全培養基。換液時，若細胞培養上清顏色變為澄清的黃色，是由于細胞量較大，培養基消耗較快導致的，請及時調整為每日換液。（注意：完全培養基加入前需提前置于37℃預熱。）
⑤細胞誘導3周后，即可進行甲苯胺藍染色鑒定。
3. 2D成軟骨細胞甲苯胺藍染色分析
①細胞誘導分化結束后，小心吸棄細胞培養上清，1×PBS潤洗1~2次，室溫固定30 min。（細胞固定液為4%中性甲醛溶液等，體積參考表二）
②吸棄細胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入甲苯胺藍染色液，染液體積請參考表二，室溫染色30min。（注意：染色液底部可能會有沉淀，吸取時盡量不要觸及底部。若染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）
③吸出染色液，1×PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細胞染色效果，背景呈淡藍色，成軟骨細胞呈紫紅色。（注意：染色液可重復使用，建議收集。）
4. 3D成軟骨誘導分化實驗步驟
①建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態良好的間充質干細胞，將其消化下來，計數。調整細胞濃度，按照每管3~4×105cell將細胞轉移至15mL離心管中，20℃，250×g離心4min。
②棄上清，每管加入0.5mL預混液，重懸細胞沉淀。20℃，150×g離心5min。
③棄上清，每管加入0.5mL成軟骨誘導分化完全培養基重懸細胞沉淀，20℃，150×g離心5min。
④將離心管樹立放置于37℃，5%CO2，飽和濕度的培養箱中培養，擰松離心管蓋以便于氣體交換。（注意：此步驟無需重懸細胞，且24h內不可晃動離心管。）
⑤約24h~48h后，細胞出現聚團現象，輕彈離心管底部使軟骨球脫離管底懸浮于培養液中。
⑥每2~3day換用新鮮的誘導分化完全培養基，持續誘導三周后，即可將培養液更換為固定液（4%中性甲醛），將軟骨球固定，后續進行切片染色鑒定實驗。
質量控制
無菌檢測（細菌、真菌和支原體檢測）
pH測試
滲透壓檢測
內毒素
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注意事項
僅限科研用。
培養體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養體系的液體和有培養體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。
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