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CY3標記
點擊次數:124 更新時間:2025-06-25

CY3標記

CY3標記反應原理:
Reactive CY3專一的與伯胺反應(N-末端及賴氨酸殘基側鏈)形成穩定的酰胺鍵

CY3標記

操作過程:
實驗前準備:

1.  仔細閱讀使用說明書。

2.  計算待使用Reactive CY3的量。

3.  提前20 min從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫(注:不需要用到的Reactive CY3繼續放置冰箱中)。

4.  溶解Reactive CY3:加入20 μL DMFReactive CY3瓶中,靜置10 min,待其充分溶解,此時CY3的濃度為10 mM


操作步驟:(本操作步驟按照1 mg的量進行標記)

1.  1 mg待標記抗體于Filtration tube中,并加入相應體積的 Labeling Buffer至總體積為0.5 mL,12,000× g離心10 min。(注:①Filtration tube的最大體積為0.5 mL待標記抗體濃度低時,可先超濾離心一次。)

2.  加入13.3 μL Reactive CY3 和適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,使抗體的終濃度為2 mg/mL,并輕輕吹打混勻。放入37℃恒溫箱中避光溫育60 min。

3.  12,000 × g離心10 min。

4.  加入適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,使終體積為0.5 mL,并輕輕吹打混勻,12,000×g離心10 min。并重復操作一次。

5.  0.2 mL Labeling BufferFiltration tube中,輕輕吹打。將濾芯倒轉放置于另一個離心管中,6,000×g離心10 min。

6.  收集離心管中的溶液,即為CY3標記的抗體。


注意事項

1.  本試劑盒也可標記其它含有氨基(NH2-)的抗原、HRP、多肽,具體標記比例根據待標記物中氨基的數量確定。

2.  DMF要密封干燥保存,使用完立即用封口膜封緊。

3.  操作步驟5中,可用Labeling Buffer作為回收標記抗體的緩沖液,也可使用其它任何緩沖液或保護劑。

4.  本試劑盒未開封前的有效期為一年,請在有效期內使用。

5.  本試劑盒提供的為10 kDaFiltration tube,標記抗原或多肽請注意分子量的大小。

6.  在步驟2中,標記其它抗體時,我們應先控制抗體的終濃度為2 mg/mL,然后再根據抗體的量計算應加入Reactive CY3的體積。

7.  要確定在偶聯中不引入游離氨基(Tris,氨及疊氮鈉均可與活化CY3反應,因此會降低蛋白與CY3的偶聯率)。


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實驗技術服務:

 


滬公網安備 31011802001678號

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